VYŠETRENIE BUNIEK IMUNITNÉHO SYSTÉMU
Podrobným vyšetrením buniek imunitného systému sa identifikujú a kvantifikujú významné populácie imunitných buniek, ktoré majú významný vplyv na stav a liečbu pacienta.
Podrobné vyšetrenie buniek imunitného systému
Laboratórium CPM identifikuje a kvantifikuje významné populácie imunitných buniek, pričom najväčší dôraz sa kladie na analýzu T-lymfocytov a ich subpopulácií, B-lymfocytov a NK buniek s využitím pokročilých hematologických analýz a prietokovej cytometrie.
T-lymfocyty a ich subpopulácie
- CD4+ T-lymfocyty (Helper T cells): regulujú imunitnú odpoveď stimuláciou B-lymfocytov a produkciou cytokínov.
- CD8+ T-lymfocyty (Cytotoxic T cells): likvidujú infikované a nádorové bunky.
- Regulačné T-lymfocyty (Tregs): udržujú imunitnú homeostázu a zabraňujú autoimunitným reakciám.
- Th17 lymfocyty: sú podtypom pro-zápalových CD4+ pomocných T-lymfocytov, ktoré sú charakteristické produkciou IL-17. Th17 bunky hrajú dôležitú úlohu pri udržiavaní slizničných bariér a prispievajú k odstraňovaniu patogénov na povrchu sliznice.
- HLA-DR+ T lymfocyty: HLA-DR prítomný na T lymfocytoch bol asociovaný s aktiváciou T buniek.
B-lymfocyty
- Produkujú protilátky, ktoré neutralizujú patogény.
NK bunky (Natural Killer cells)
- Rozpoznávajú a ničia nádorové a vírusom infikované bunky bez predchádzajúcej aktivácie alebo senzibilizácie.
- CD57+ NK bunky: určenie absolútneho počtu aktivovaných CD57+ NK buniek sa odporúča ako spoľahlivý marker prechodu akútnej formy LB do chronickej a ďalej ako marker úspešnosti terapie antibiotikami. Pri výskumných štúdiách mali pacienti s chronickou boreliózou výrazne nižší počet CD57+ NK buniek v porovnaní s pacientmi s akútnou boreliózou a s inými formami imunodeficiencie (AIDS).
NKT bunky
- NK T-lymfocyty (NKT bunky) sú T-lymfocyty, ktoré majú niektoré vlastnosti NK buniek. Majú veľmi dôležitú úlohu v regulácii imunitných odpovedí premostením zložiek vrodeného a adaptívneho imunitného systému a môžu tiež aktivovať či inhibovať imunitné reakcie.
Testovanie imunitnej odpovede na patogény
Laboratórium CPM testuje imunitnú odpoveď lymfocytov na nasledujúce patogény:
Bakteriálne patogény:
- Borrelia burgdorferi sensu lato: spôsobuje lymskú boreliózu, ochorenie prenášané kliešťami, ktoré môže ovplyvniť kožu, kĺby, srdce a nervový systém.
- Anaplasma phagocytophilum: spôsobuje ľudskú granulocytovú anaplazmózu, infekciu prenášanú kliešťami, ktorá sa prejavuje klinicky rozmanitými a nešpecifickými príznakmi ako sú horúčka, bolesti hlavy a svalov, únava, kašeľ a ďalšími systémovými príznakmi.
- Babesia microti: spôsobuje babesiózu, parazitické ochorenie prenášané kliešťami, ktorého ťažký priebeh môže pripomínať maláriu a spôsobovať hemolytickú anémiu.
- Bartonella henselae: spôsobuje ochorenie mačacích škrabancov, ktoré môže viesť k regionálnej lymfadenopatii a v niektorých prípadoch aj k systémovým infekciám.
- Rickettsia spp.: spôsobuje rôzne rickettsiové infekcie, vrátane škvrnitých horúčok, ktoré sa prenášajú cez vektory ako sú kliešte, blchy a vši.
- Yersinia: Yersinia enterocolitica a Yersinia pseudotuberculosis môžu spôsobovať gastrointestinálne infekcie. Pri dlhodobom ochorení môže dôjsť ku komplikáciám ako zápaly kĺbov, ktoré môžu prejsť do reumatoidnej artritídy. Patogény sa prenášajú alimentárne cez nakazené surové bravčové mäso.
- Chlamydia pneumoniae: spôsobuje respiračné infekcie, vrátane pneumónie a bronchitídy. Je to výhradne ľudský patogén.
- Chlamydia trachomatis: spôsobuje rôzne infekcie urogenitálneho traktu, vrátane chlamýdiovej uretritídy a cervicitídy. Chlamýdiová infekcia je v súčasnosti jednou z najviac rozšírených sexuálne prenosných chorôb.
- Mycoplasma pneumoniae: je najvýznamnejším patogénom ľudského respiračného systému. Je to hlavný pôvodca veľkého počtu respiračných infekcií vrátane atypickej pneumónie a iných respiračných infekcií.
Vírusové patogény:
- Cytomegalovírus (CMV): člen rodiny herpesvírusov, ktorý môže spôsobiť závažné ochorenia u imunokompromitovaných jedincov a novorodencov.
- Epstein-Barrovej vírus (EBV): spôsobuje infekčnú mononukleózu a je spojený s rôznymi typmi rakoviny, vrátane Burkittovho lymfómu a nasofaryngeálneho karcinómu.
- Influenza vírus: spôsobuje sezónnu chrípku, ktorá môže viesť k závažným respiračným ochoreniam a komplikáciám.
- Herpesvírus-1 (HSV-1): spôsobuje orofaryngeálne infekcie a zvyčajne sa prenáša slinami. V závažných prípadoch u imunokompromitovaných jedincov a detí sa môže vyvinúť život ohrozujúca herpetická encefalitída.
- Herpesvírus-2 (HSV-2): primárne spôsobuje genitálny herpes. V závažných prípadoch u imunokompromitovaných jedincov a detí sa môže vyvinúť život ohrozujúca herpetická encefalitída. Prenáša sa sexuálnou cestou alebo z matky na novorodenca pri pôrode.
- SARS-CoV-2 vírus: spôsobuje ochorenie COVID-19, ktoré vedie k širokému spektru symptómov od miernych respiračných príznakov až po ťažký akútny respiračný syndróm.
- LFA–1: autoantigén (OspA proteín Borélií a LFA-1 proteín majú vysoko príbuzné peptidové epitopy) voči ktorým reagujú T lymfocyty a B lymfocyty vytvárajú protilátky. Predpokladá sa skrížená reakcia. Prítomnosť protilátok, obzvlášť u pacientov s fenotypom HLA-DR4, spôsobí rozvoj autoimunitných ochorení: kolagenóza, reumatoidná artritída, vaskulitída (ANA, CCP protilátky, ANCA). Testovanie reaktivity T lymfocytov voči LFA-1 pomáha rozhodnúť, či pacient trpí aktívnou infekciou (lymskou boreliózou) alebo autoimunitným ochorením.
Metódy testovania
EliSpot a FluoroSpot (iSpot)
- EliSpot: táto metóda je založená na detekcii cytokínov alebo iných molekúl sekretovaných jednotlivými bunkami, čo umožňuje monitorovanie imunitných odpovedí, najmä v kontexte infekčných ochorení, autoimunitných ochorení a alergií. Výhody zahŕňajú vysokú citlivosť a kvantifikáciu sekrécie cytokínov na úrovni jednotlivých buniek.
- FluoroSpot: rozšírenie techniky EliSpot s použitím fluorescenčných farbív namiesto enzýmov, čo umožňuje simultánnu detekciu viacerých cytokínov z jednej bunky. Výhody zahŕňajú schopnosť multiplexingu a vyššiu flexibilitu v analyzovaní imunitnej odpovede.
qPCR (kvantitatívna polymerázová reťazová reakcia)
- Používa sa na detekciu a kvantifikáciu genetického materiálu patogénov, čo umožňuje presnú diagnostiku infekcií, vrátane tých prenášaných kliešťami, ako sú lymská borelióza, anaplazmóza, kliešťová encefalitída, babesióza a bartonelóza.